维生素D的测定方法

　　高效液相色谱法

　　1. 原理

　　样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，以石油醚萃取后，用正相色谱柱提取富集，用反相色谱柱，紫外检测器定量测定。

　　2. 适用范围

　　本方法来源于GB/T 5413.9-1997。适用于婴幼儿配方食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定;也适用于食品或强经食品及饲料中的维生素D含量的测定。

　　3. 主要仪器

　　1) 高压液相色谱仪，具有可变波长的紫外检测器，数据处理系统或记录仪。

　　2) 旋转蒸发器。

　　3) 平底烧瓶：250mL。

　　4) 分液漏斗：500mL。

　　4. 试剂

　　所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所实验用水均指蒸馏水。

　　1) 异丙醇：色谱纯。

　　2) 2%焦性没食子酸乙醇溶液：取2g焦性没食子酸溶液于100mL无水乙醇中。

　　3) 75%氢氧化钾溶液：取75g氢氧化钾溶于100mL水中。

　　4) 石油醚：沸程30～60℃。

　　5) 甲醇：色谱纯。

　　6) 正己烷：色谱纯。

　　7) 环己烷:色谱醇。

　　8) 维生素D标准溶液

　　A. 维生素D2标准贮备液：含维生素D2100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D2，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

　　B. 维生素D3的标准贮备液：含维生素D3100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D3，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

　　5. 操作步骤

　　5.1样品处理：准确称取10g样品，于250mL平底烧瓶中，加30mL蒸馏水。